Садржај

• Упутства

Када похађате микробиологију вишег нивоа, ваш наставник може захтијевати од вас да завршите пројекат у којем морате идентифицирати непознату бактерију кроз низ тестова. Да би се ова бактерија правилно идентификовала, неопходно је имати сву одговарајућу лабораторијску опрему и познавати различите лабораторијске процедуре. Такође је корисно имати дијаграм тока бактерија и њихове лабораторијске тестове, тако да можете да идентификујете ваше бактерије.

Упутства

Културне плоче омогућавају да се бактерије изолују како би се лако идентификовале њихове карактеристике (Хемера Тецхнологиес / Пхотос.цом / Гетти Имагес)

1. Припремите све тестове пре почетка експеримента. То укључује припрему агар плоча и епрувета, као и припрему потребних индикатора, као што је Ковацов реагенс. Означите све епрувете и плоче на одговарајући начин тако да се не мијешају, што доводи до погрешних резултата.

2. Сијте своје бактерије. Ово ће одредити облик и боју ваше бактерије, као што су грам-позитивни (љубичасти), грам-негативни (црвени или ружичасти), кокоси (кружни), спирохете (спирале) или шипке. Да бисте посијали своју бактерију, требат ће вам чиста оштрица, вода, кристалисана љубичица, јод, избјељивач, сафранин, упијајући папир, свјетлосни микроскоп и неки папирнати ручници. После фламбовања петље, користите је да ставите кап воде на сечиво. Поново запетите петљу и ставите малу количину непознатих бактерија у кап воде. Прођите нож преко пламена неколико пута да се осушите и потпуно причврстите бактерије на сечиво. Покријте га кристализованом љубичицом, оставите је на минут и затим је пажљиво оперите. Затим прекријте оштрицу јодом. Оставите да стоји 30 секунди, а затим оперите. Ставите комад упијајућег папира преко сечива да бисте уклонили вишак воде. Затим сипајте избељивач на сечиво. После пет секунди, оперите да бисте уклонили избељивач. Коначно, покријте сечиво сафранином. Након 40 секунди оперите оштрицу и њежно је осушите папирним убрусом. Ставите кап уља на место бактерија на слајду и погледајте под микроскопом. Обратите пажњу на облик и боју видљивих бактерија.

   
   

3. Тестирајте оксидазу у вашој бактерији. За то ће вам бити потребан папирни филтер, оксидазни реагенс, Е. цоли, Псеудомонас и његове непознате бактерије. У овом тесту, Е. цоли и Псеудомонас су контроле. Ваша бактерија би требала бити млађа од 24 сата за овај тест. Затворите ручку и ставите малу количину сваке бактерије на филтер папира. Користите капаљку да ставите једну кап реагенс оксидазе у сваку бактерију. После 10 секунди, забележите боју сваке бактерије. Е. цоли ће дати позитиван резултат и Псеудомонас ће дати негативан резултат. Бактерије позитивне на ензим цитохромоксидазу постају љубичасте, а негативне бактерије неће променити боју.

4. Тест на водиков сулфид (СИМ). Померите ручицу и употребите је да покупите неке бактерије са плоче. Инокулирајте СИМ цев с бактеријама и покријте је. Оставите ову епрувету у рерни 18 до 24 сата на 37 ° Ц. Идентификујте да ли је ваша бактерија покретна (има флагеллум). Ако постоји раст и замућеност далеко од места где сте инокулисали бактерију, она је мобилна. Затим, ставите две капи Ковац реагенса у епрувету. Ако има промену боје у црвену или ружичасту боју, његова бактерија је позитивна за овај тест и садржи триптофан, што значи да је произвођач индола. Ако цев постане црна, бактерије производе водоник-сулфид.

   
   

5. Изведите тест Симмон цитрата. Инокулирајте бактерије у две епрувете са Симмоновим агарима. Оставите их у рерни 18 до 24 сата на 37 ° Ц. Агар је у почетку зелен, али ако ваша бактерија користи цитрат као извор угљеника, боја ће се променити из зелене у плаву. Плави је позитиван резултат. Ако цеви остану зелене, њихове бактерије су негативне за употребу цитрата као јединог извора угљеника.

6. Извршите тест метил црвене боје (МРВП). За овај тест, потребне су вам две епрувете које садрже раствор пептона, пуфера и декстрозе (или глукозе). Инокулирајте сваку епрувету са непознатим бактеријама и вратите се у пећ 18 до 24 сата на 37 ° Ц. Када сте спремни, додајте три капи метил црвене боје у епрувету. Ово ће бити ваша МР цев. Ако се цев промени из жуте у црвену, њена бактерија је позитивна и користи мешани киселински пут током ферментације (производе се млечна, сирћетна и мравља киселина). У другу епрувету додајте три капи реагенса ВП. Ако цев постане црвена, бактерија је позитивна на формирање диацетила, продукта ферментације. Ако цев постане смеђа, ваша бактерија је негативна.

7. Пронађите своје бактерије бележећи позитивне и негативне резултате у дијаграму тока.