Садржај
Хладни алкохол се користи за одвајање ДНК од раствора на бази воде, дозвољавајући да се пречисти за накнадно генетско тестирање. Додавање алкохола у раствор који садржи ДНК је једноставан начин да се направи чист на нижим температурама и успорава ензиме који га разграђују, дајући боље резултате екстракције.
Бреакинг Целл Валлс
Поступци екстракције за добијање чисте ДНК морају да се ослободе свих молекуларних и хемијских компоненти ткива из којег је ДНК екстрахована. Први кораци укључују уништавање ћелијских зидова. То се може урадити са различитим хемијским агенсима који су нагризајући за ћелијске мембране, али не оштећују ДНК. Ћелије се такође могу соницирати, хомогенизовати или млевено да би се уништиле мембране.
Уклањање липида
Када су ћелијски зидови уништени, додаје се детерџент да се ослободе масноћа и уља које чине ћелијске мембране. Детерџенти узрокују растварање уља и масти у раствору.
Уклањање протеина
Протеини и ензими могу да се дигестују додавањем протеазе у раствор. Протеазе разлажу протеине на мале пептиде и аминокиселине.
Преципитатинг ДНА
Додавање ледено хладног алкохола у раствор преципитира и агрегира ДНК. Генетски материјал се може сакупити центрифугирањем узорка и декантирањем течног слоја. Треба да постоји као мали талог на дну епрувете за центрифугирање.
Прочишћавајући ДНК
ДНК се може испрати поновном суспензијом у хладном алкохолном раствору и поново центрифугирати неколико пута да се добије веома чист узорак. Типични алкохоли који се користе укључују етанол и изопропанол. Овај процес оставља веома чист узорак у ригорозним тестовима.
